前言

卵巢癌(ovarian carcinoma)是女性生殖系統(tǒng)常見(jiàn)的惡性腫瘤，其發(fā)病率、病死率均居?jì)D科惡性腫瘤前列。目前建立卵巢癌動(dòng)物模型的方法有自發(fā)性的卵巢腫瘤動(dòng)物模型、體外轉(zhuǎn)化卵巢上皮細(xì)胞的移植瘤、致癌物誘發(fā)卵巢腫瘤以及基因工程卵巢腫瘤動(dòng)物模型。

近年來(lái)，隨著新技術(shù)發(fā)展，基因工程改造小鼠的卵巢上皮性癌模型逐漸發(fā)展及應(yīng)用起來(lái)。與以往傳統(tǒng)化學(xué)致癌物誘導(dǎo)動(dòng)物模型相比，利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)將腫瘤形成相關(guān)基因轉(zhuǎn)入動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行表達(dá)而建立的腫瘤模型的致癌過(guò)程和病理表現(xiàn)更接近人體。而且，在腫瘤形成的誘導(dǎo)過(guò)程中，可在自然狀態(tài)下促使正常細(xì)胞向腫瘤細(xì)胞演變，同時(shí)各種癌前病變均可顯示，從而更利于進(jìn)行腫瘤形成的研究。

部分造模方法

使用動(dòng)物：大鼠

【造模機(jī)制】：

利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)，將基因的DNA片段注入受精卵或用重組病毒攜帶目的基因感染早期胚胎，使出生的小鼠表達(dá)有某個(gè)目的基因，如一些癌基因，從而觀察這個(gè)基因?qū)δ[瘤發(fā)生的影響。目前用轉(zhuǎn)基因鼠去研究卵巢癌的發(fā)生發(fā)展，集中在卵巢特異性的啟動(dòng)子是為了確保目的基因僅 在卵巢上皮細(xì)胞(ovarian surface epithelium,OSE)表達(dá)而不在其他組織中表達(dá)，從而更好地模擬人類(lèi)卵巢癌的發(fā)生。

【造模方法】：

1.顯微注射法制備轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型 用于顯微注射的卵巢癌轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型的啟動(dòng)子有inhibin-alpha、OSP-1和MISⅡR啟動(dòng)子。用inhibin­alpha啟動(dòng)子，將SV40 TAg(large SV40 T antigen)用轉(zhuǎn)基因方法使其在粒層細(xì)胞表達(dá)而誘發(fā)了粒層細(xì)胞瘤。OSP-1(ovarian  specific promoter)啟動(dòng)子能使目的基因特異性地在正常卵巢上皮及卵巢癌細(xì)胞表達(dá)，當(dāng)轉(zhuǎn)入LacZ基因后，用X-gal染色方法檢測(cè)多個(gè)器官發(fā)現(xiàn)，LacZ的表達(dá)僅局限在卵巢。但用OSP-1作為啟動(dòng)子，SV40TAg轉(zhuǎn)基因大鼠腫瘤動(dòng)物模型中，除卵巢外，其他多處組織還發(fā)生腫瘤，因此，盡管OSP-1使目的基因主要在卵巢轉(zhuǎn)錄，但真正還是缺乏特異性，還是不可避免地使SV40TAg在其他少數(shù)的組織表達(dá)而發(fā)生腫瘤。另外一個(gè)是啟動(dòng)子MISⅡR (the Mullerian inhibitory substance type Ⅱ receptor),MISⅡR的表達(dá)僅局限于胚胎時(shí)期苗勒管周?chē)拈g質(zhì)細(xì)胞、胚胎管狀和裂泡狀性腺細(xì)胞、成年睪丸的Sertoli和Leydig細(xì)胞，卵巢的粒層細(xì)胞，其有強(qiáng)大的啟動(dòng)功能和對(duì)卵巢有特異性，在人卵巢癌細(xì)胞系中可見(jiàn)有MISⅡR的表達(dá)。2003年，Connolly等首次成功通過(guò)苗勒管抑制物Ⅱ基因啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)基因調(diào)控表達(dá)早期SV40TAg基因，建立表達(dá)漿液性卵巢上皮性癌病例特征的自發(fā)卵巢癌轉(zhuǎn)基因小鼠模型。用MISⅡR作為啟動(dòng)子將SV40TAg受精卵顯微注射的方法產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因鼠，出生后能夠超過(guò)50％的小鼠雙側(cè)卵巢產(chǎn)生卵巢癌，但也有腎和腦腫瘤的發(fā)生。

2.重組病毒攜帶目的基因直接囊內(nèi)注射誘發(fā)卵巢腫瘤 將重組的攜帶有目的基因的腺病毒用內(nèi)注射的方法注射到小鼠卵巢的包膜下，通過(guò)腺病毒感染OSE細(xì)胞，而將目的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)入OSE細(xì)胞，這種方法能夠很好地模擬在早期卵巢癌發(fā)生時(shí)體細(xì)胞突變時(shí)的情形。最近有報(bào)告用這種方法將Cre-loxP轉(zhuǎn)入OSE細(xì)胞，從而阻斷了p53和Rb的表達(dá)而發(fā)生腫瘤。因小鼠卵巢襄能局限性傳遞Cre重組腺病毒，大量學(xué)者將其運(yùn)用于卵巢表面上皮，使Cre重組酶－P1交換位點(diǎn)序列(Cre-LoxP)中介的基因失活，條件性地表達(dá)腫瘤抑制基因，從而建立卵巢癌基因工程模型。

姚德生用攜帶有c-Myc和k-Ras基因的重組反轉(zhuǎn)錄病毒感染OSE后，將Ras和RM組細(xì)胞腹腔注射于裸鼠體內(nèi)，成功制備小鼠卵巢癌動(dòng)物模型。突變的k-Ras作為一個(gè)癌基因，能夠促進(jìn)OSE細(xì)胞的增殖，賦予OSE侵襲的能力，同時(shí)可使OSE發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。c-Myc作為一個(gè)核轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，單獨(dú)不能使細(xì)胞增殖加快，也不能使OSE發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化，在體內(nèi)也不能形成腫瘤，但可協(xié)同其他因子如k-Ras，加強(qiáng)其功能，賦予細(xì)胞更強(qiáng)的生長(zhǎng)和侵襲能力。

【模型的評(píng)估和應(yīng)用】：

轉(zhuǎn)基因鼠卵巢癌動(dòng)物模型是研究卵巢癌發(fā)生的極為有價(jià)值的動(dòng)物模型，這種模型通過(guò)各種各樣的方法，去了解和研究各種因素對(duì)卵巢癌發(fā)生所起的作用，特別是一些癌基因和抑癌基因在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中是如何發(fā)揮作用的，可以通過(guò)使用具有不同遺傳背景的品系的小鼠，研究不同因素的相互作用，比如可以選用不同排卵頻率、不同激素水平的品系而使實(shí)驗(yàn)達(dá)到不同目的。這種模型還可以幫助我們了解腫瘤是如何從OSE細(xì)胞變?yōu)槟[瘤細(xì)胞，這種轉(zhuǎn)基因的模型不同于以往的移植瘤模型，這種模型可以研究一些遺傳致病因素在卵巢癌發(fā)生的不同時(shí)期的作用，特別是早期剛剛開(kāi)始發(fā)生癌變時(shí)，如原位癌階段。此模型可作為評(píng)估分子靶向治療的臨床前期模型，尤其對(duì)于一些特定的上皮性卵巢癌亞型更有臨床意義。利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)將腫瘤形成相關(guān)基因轉(zhuǎn)入動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行表達(dá)建立的腫瘤模型的致癌過(guò)程和病理表現(xiàn)更接近人體，從而為探索人卵巢癌的病因及發(fā)病機(jī)制、發(fā)病過(guò)程、轉(zhuǎn)移、多藥耐藥等生物學(xué)行為提供了一種可靠手段。

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