注：以下所有樣本盡量新鮮！

1、動(dòng)物組織采集（樣本量盡量保證在綠豆大小，約200mg以上）

① 取材應(yīng)在冰上進(jìn)行，取材后組織用生理鹽水沖洗干凈，去除血漬和污物，并剔除非研究所需的組織；

② 吸干水漬并切小塊，放入已標(biāo)記的凍存管中，液氮速凍后，轉(zhuǎn)運(yùn)至-80℃冰箱保存。

2、貼壁細(xì)胞RNA采集樣本（樣本量1*10^8以上）

RNA試劑盒法：

① 用微量移液器將細(xì)胞培養(yǎng)液吸除干凈，加入1ml 4℃預(yù)冷PBS溶液，輕搖洗滌；

② 將PBS吸除干凈后，再加入1ml PBS，用細(xì)胞刮收集細(xì)胞，3000rpm離心10min，棄去上清液，收集細(xì)胞沉淀，液氮速凍后轉(zhuǎn)運(yùn)至-80℃冰箱保存；

③ 使用RNA提取試劑盒提取RNA，具體提取方法以試劑盒說明書為準(zhǔn)。提取樣本經(jīng)液氮速凍后轉(zhuǎn)運(yùn)至-80℃冰箱保存。

Trizol法：

① 貼壁細(xì)胞培養(yǎng)或處理結(jié)束后，去除培養(yǎng)液；

② 每10c㎡培養(yǎng)面積加入1ml Trizol試劑；

③ 用1ml槍頭反復(fù)吹打,使Trizol與細(xì)胞充分接觸并消化；

④ 將上述溶液轉(zhuǎn)移到試管中，用一次性注射器（或者槍頭）反復(fù)吹打細(xì)胞，直至看不見成團(tuán)的細(xì)胞塊，使溶液呈現(xiàn)清亮且不粘稠的狀態(tài)；

⑤ 經(jīng)液氮速凍后轉(zhuǎn)運(yùn)至-80℃冰箱保存。

3、懸浮細(xì)胞RNA采集（樣本量1*10^8以上）

RNA試劑盒法：

① 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)或處理結(jié)束后，3000rpm，離心10min，去除培養(yǎng)液；

② 收集細(xì)胞后，加入1ml 4℃預(yù)冷PBS溶液，輕搖洗滌，3000rpm，離心10min，棄去上清液，收集細(xì)胞沉淀，液氮速凍后轉(zhuǎn)運(yùn)至-80℃冰箱保存；

③ 使用RNA提取試劑盒提取RNA，具體提取方法以試劑盒說明書為準(zhǔn)。提取樣本經(jīng)氮速凍后轉(zhuǎn)運(yùn)至-80℃冰箱。

Trizol法：

① 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)或處理結(jié)束后，離心收集細(xì)胞，去除培養(yǎng)液

② 保留的細(xì)胞用PBS快速洗一次，離心除去PBS；

③ 每1×10^6個(gè)細(xì)胞加1ml Trizol試劑，用一次性注射器進(jìn)行反復(fù)吹打直至看不見成團(tuán)的細(xì)胞塊，整個(gè)溶液呈清亮且不粘稠的狀態(tài)；

④ 經(jīng)液氮速凍后轉(zhuǎn)運(yùn)至-80℃冰箱保存。

4、血液樣本采集

全血樣本(以下方法步驟僅供參考）

哺乳動(dòng)物需要采集白細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)，（具體方法需參考各種分離液試劑說明書）

① 將新鮮全血收集于抗凝管中，上下輕輕顛倒幾次使血液與抗凝劑充分混勻，置于4°C或冰盒中正立放置；

② 每1ml新鮮抗凝血中加入10ml紅細(xì)胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解4-5分鐘；

③ 加入20-30ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液；

④ 2400rpm-2700rpm離心5分鐘，棄紅色上清；

⑤ 重復(fù)步驟③和步驟④，直至紅細(xì)胞裂解完全，收集細(xì)胞沉淀；

⑥ 每1×10^6個(gè)細(xì)胞加入1ml Trizol試劑，液氮速凍后，轉(zhuǎn)運(yùn)至-80℃冰箱保存。

5、血清樣本采集（備注：因其RNA豐度很低，PCR可能擴(kuò)增不出來）

① 用無抗凝劑血清管收集全血樣本，預(yù)留一定空間便于血清分離，置于4°C或冰盒中正立靜置10-20分鐘；

② 3000-3500rpm，離心10-15分鐘，取上清于離心管（RNasefree）中;

③ 將分裝好的血清轉(zhuǎn)運(yùn)至-80℃冰箱保存。

6、血漿樣本采集（備注：因其RNA豐度很低，PCR可能擴(kuò)增不出來）

① 將新鮮全血收集于抗凝管中，上下輕輕顛倒幾次使之與抗凝劑充分混勻，置于4°C或冰盒中正立靜置10-20分鐘；

② 3000-3500rpm，離心10-15分鐘，取上清于離心管中;

③ 將分裝好的血漿轉(zhuǎn)運(yùn)至-80℃冰箱保存。

7、菌類（1*10^8 CFU以上的菌體）

液體培養(yǎng)基：

① 挑取單菌落于50ml液體培養(yǎng)基中，適宜溫度培養(yǎng)過夜，并在對數(shù)生長期進(jìn)行菌體采集；

② 培養(yǎng)好的菌液適量轉(zhuǎn)入合適的離心管中，高速離心收集菌體，棄去上層培養(yǎng)基，用封口膜封口后液氮速凍，轉(zhuǎn)運(yùn)至-80℃冰箱保存，大體積干冰運(yùn)輸；

固體或半固體培養(yǎng)菌種收集：

① 涂布平板培養(yǎng)的微生物，在菌體生產(chǎn)最旺盛時(shí)期刮下，置于1.5或2.0ml的離心管中，迅速液氮速凍。

② -80℃冰箱保存，轉(zhuǎn)運(yùn)至-80℃冰箱保存，大體積干冰運(yùn)輸。

樣本準(zhǔn)備注意事項(xiàng)：

① 小體積的昆蟲類組織，如寄生蜂、螨等，可考慮用RNA保護(hù)劑進(jìn)行樣本收集，RNA保護(hù)劑的使用參照試劑說明書；

② 所有直接接觸樣本的試劑、耗材等物品均需要處于無RNA酶（RNasefree）環(huán)境；

③ 肝素會(huì)影響下游建庫測序，EDTA不適用于部分成分分析及PCR實(shí)驗(yàn)，采集血液樣本時(shí)需根據(jù)檢測需求慎重選擇抗凝劑；

④ RNA樣本提取可采用RNA試劑盒、Tirzol法等，注意RNA樣本的純化，避免多糖多酚、蛋白和其它雜質(zhì)的殘留。提取完成后，提供Nanodrop、AGE或Agilent 2100中一種或多種形式的分析結(jié)果以判斷RNA的完整性、濃度、總量是否滿足需求。寄送TotalRNA的需注明提取所用的方法，如試劑盒或Tirzol法等；

⑤ 樣本標(biāo)簽勿粘貼在EP管或錫箔紙上，低溫下標(biāo)簽紙易脫落，建議使用記號筆標(biāo)記；

⑥ 細(xì)胞樣本不建議采用粘稠保護(hù)劑保存，否則將無法離心收集存放在保護(hù)劑的細(xì)胞樣本；

⑦ RNAlater、RNAstore等保護(hù)劑在25℃下能穩(wěn)定保存樣本3天，4℃保存樣本7天、-20℃條件下可長期保存樣本。建議用保護(hù)劑保存的樣本厚度不超過0.5cm。保護(hù)劑不適用于血液和液態(tài)樣本，組織樣本與保護(hù)劑的用量至少為1:10，RNAstore不適用于植物樣本保存。（不同保護(hù)劑保存時(shí)間有差異，具體以保護(hù)劑說明書為準(zhǔn)）；

⑧ Trizol為裂解液，不適用于組織樣本的保存，細(xì)胞除外。當(dāng)細(xì)胞存放在Trizol中需注明每管的細(xì)胞數(shù)量。

樣本寄送注意事項(xiàng)：

① 樣本需要使用干冰進(jìn)行寄送，干冰消耗量為4-5kg/天（根據(jù)溫度會(huì)有所變動(dòng)），訂購量以快遞實(shí)際運(yùn)輸天數(shù)為準(zhǔn)（避開大型節(jié)假日及線上購物節(jié)）。干冰采用厚實(shí)的泡沫箱進(jìn)行打包，外側(cè)用透明膠封好；

② 樣本寄送我司時(shí)需填寫《項(xiàng)目送樣單》。送樣單中樣本信息、數(shù)量、分組與編號需與實(shí)際保持一致，紙質(zhì)版送樣單隨樣本寄出,電子版送樣單及寄送快遞單號發(fā)送給公司，以便核對及備份數(shù)據(jù)；

③ 在我司完成測序分析后，剩余樣本需要返還的項(xiàng)目，需在收到項(xiàng)目完整版結(jié)題報(bào)告3個(gè)月內(nèi)聯(lián)系我司進(jìn)行樣本返還，逾期樣本將進(jìn)行銷毀。如果樣本特別珍貴，需提前說明。樣本返回需要送樣方承擔(dān)返還費(fèi)用（包括干冰費(fèi)和快遞費(fèi)）；

④ 為確保實(shí)驗(yàn)的順利，送檢方需盡可能提供樣本，以防部分樣本降解重新取材、制備或送樣，耽誤檢測進(jìn)程。